【血红蛋白测定】 [原创]

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实验简介

血红蛋白(Hemoglobin,Hb或HGB)是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质,是能使血液呈红色的蛋白。血红蛋白由四条链组成,两条α链和两条β链,每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。Hb在氧含量高的区域,容易与氧结合;在氧含量低的区域,又容易与氧分离。血红蛋白的这一特性,使红细胞具有运输氧的功能。

参考文献


                        

实验原理

本方法的原理是:在酸性条件下产物呈红色,吸收峰在530nm,产物红色越深,说明Hb含量越高,反之则越低,通过分光光度比色法测定530nm处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出血清血红蛋白含量水平。该试剂盒主要用于检测溶血血清样本,亦可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液等中血红蛋白含量。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

安全性


                                            

主要试剂/材料

酶标仪 1
移液枪 若干
96孔板 1

【血红蛋白测定】的实验步骤

第1步

 配制检测工作液:所有试剂由北京雷根生物技术有限公司提供

① 配制显色工作液:取Hb Assay buffer至室温,取显色底物溶解于Hb Assay buffer,

即为显色工作液。 ② 配制标准品工作液。 2、 准备样品:

① 溶血标本血清:溶血血清按照常规方法制备后,-80℃冻存。使用时用生理盐水稀

释100倍。

② 细胞或组织样品:取恰当的细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速

离心取上清,-80℃冻存。

第2步

检测:
(1)按照图在96孔板中,空白对照、标准品、待测样品,溶液应按照顺序依次加入,

并注意避免产生气泡。如果样品中的血红蛋白含量过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔,尤其是标准品应作三复孔。
(2)按照上表依次加入待测样品、显色工作液、标准品工作液、ddH2O 至空白对照孔、标准品孔、待测样品孔,轻轻混匀,37℃恒温准确孵育10min 。
(3)每孔加入Acid Assay buffer,轻轻混匀。

(4)检测530nm 处吸光度即A 530,如果无法检测530nm ,亦可检测520~540nm 范围内吸光度,一般应数小时内检测完毕。

第3步

计算结果:

血清血红蛋白(mg/L)=待测样品吸光度/标准品吸光度×13.2×100(mg/L)。
注意事项:(1)Hb(1mg/ml)和标准品工作液(13.2μg/ml)均应-20℃保存,同时应避免反复冻融。

(2)没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但应考虑根据比色杯的最小检

测体积,尽量采用小体积的比色杯。

(3)1支显色工作液配制后应尽快用完,因此请注意适当多准备一些样品一起检测。

实验结果

图为用本方法检测的血红蛋白含量在不同处理组的变化。

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