【动物组织固定液配制和使用】 [原创]

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实验简介

组织固定液是动物实验,病理实验中常用的试剂,目前有多种动物组织固定试剂,其主要用有所不同。在动物组织固定时,不同的固定液对应着不同的实验。

参考文献


                        

实验原理


                        

安全性


                                            

主要试剂/材料

甲醛 1
醋酸 1
磷酸二氢钠 1
磷酸氢二钠 1
天平 1
NaCl 1
蔗糖 1
氯仿 1
乙醇 1
蒸馏水 1

【动物组织固定液配制和使用】的实验步骤

第1步

10%福尔马林固定液:
40%甲醛(100 mL)+  蒸馏水(900mL)。
用途:这是一种最简单的固定液,但由于它的单一性,很多研究中不推荐用这种固定液。

第2步

10%缓冲福尔马林固 定液:
40%甲醛(100mL)+ 蒸馏水(900mL) + NaH2PO4(4g) + Na2HPO4 (6.5g).
用途:该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固定较好,损伤较少,因对其后的各方面研究都较好,尤其是对免疫组化的染色。在病理切片固定中此固定也好于4%多聚甲醛固定液和AF固定液

第3步

4%多聚甲醛固定液
称取40g多聚甲醛,置于三角烧瓶中,加入500~800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液(Phosphate Buffer以下简称PB),加热至60℃左右,持续搅拌(或磁力搅拌)使粉末完全溶解,通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮,最后补足0.1mol/L的PB于1000ml,充分混匀。
用途:该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究,最好是动物经灌注固定取材后,继续浸泡固定2~24h。另外,该固定剂较为温和,适于组织标本的较长期保存。

第4步

Bouin氏固定液:
苦味酸饱和液(1.22%)75ml + 福尔马林25ml +冰醋酸5ml 。
用途:其渗透能力强,固定均匀,组织收缩小,染色效果好。  适用范围广,特别适合于富含结缔组织的标本和胚胎标本。能够软化皮肤角质,并可以用于植物组织的固定。

第5步

醛糖钙固定液:
甲醛100ml + 蔗糖300ml + 乙酸钙20g + 蒸镏水90ml。
用途:该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好,组织固定后,做冰冻切片,再给予显示。

第6步

AF固定液:
甲醛 100 ml + 冰醋酸 50 ml  + 95%酒精 850 ml 。
此固定液不宜用于免疫组化。

第7步

Zenker氏固定液:无水醋酸钠 1.25 g升汞+ 6.0 g蒸馏水+ 90 ml,使用前加入甲醛10 ml。
用途:多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。

第8步

Carnoy固定液:无水乙醇 60 ml + 氯仿 30 ml + 冰醋酸10 ml.
用途:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。

第9步

Flemming氏液:
2%酸水溶液 200ml +1%铬酸水溶液 700ml + 冰醋酸 100ml。
用途:该液中的奥酸对脂肪组织既有固定作用,又有染色作用,对有髓神经纤维也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色,该液不适合。应 用该液固定的组织,切片不能太大过厚,一般 1-2毫米厚固定时间1-3天,后经水洗,保存 于80%酒精中。

实验结果

图为10%福尔马林中心固定液和4%多聚甲醛固定液处理后的干切片。

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